通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據(jù)細胞類型判斷。
常規(guī)的PCR需要專門制備DNA模板,面菌落PCR可直接以單個菌落作為模板,用無菌牙挑取單個菌落到TE級沖液中,煮沸10mn,渦旋振蕩后短暫離心,用1-2pl裂解液作為DNA模板,省去抽提模板DNA這一步,通過特異性引物或通用引物對目的基因進行快速擴增大大節(jié)約了時間和成本
操作中必須有“無菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝,應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應(yīng)當在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘,每個平板不得超過15個菌落。
菌種在分離、保藏和生產(chǎn)過程中,極易遭致雜菌污染,因此必須對染有雜菌的菌種進行提純,方能用于生產(chǎn)。根據(jù)污染的類型和程度,需采用不同的純化措施。
穩(wěn)定細胞系是指將外源基因整合到宿主細胞基因組中,使外源基因能夠在宿主細胞中長期穩(wěn)定表達,這樣的細胞系稱為穩(wěn)定細胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上,通過轉(zhuǎn)染宿主細胞,外源基因整合到宿主染色體上,用載體中所含抗性基因進行篩選即可得到成功整合目的基因的細胞。
冷凍切片技術(shù),是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度,然后進行切片的一種方法。被稱為病理科的急診工作----在外科手術(shù)過程中,醫(yī)生切取部分腫瘤組織或其它病變標本,送檢到病理科通過快速冷凍標本制作切片,病理科診斷醫(yī)師對該切片進行觀察快速做出判斷得出良、惡性結(jié)果或某種疾病的診斷。
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結(jié)構(gòu)不同可采用不同的方法。對于制備HRP結(jié)合物,可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。
牛源血清又分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,它們的區(qū)別方式主要由于牛齡和采血方式不同,其中胎牛血清因其抗體水平含量低對后續(xù)實驗結(jié)果影響小、生長因子含量水平高利于細胞增殖而應(yīng)用最廣。
大腸桿菌(E.coli)重組蛋白表達技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展,相對于其他表達體系,算是非常成熟的一個體系。大腸桿菌蛋白表達系統(tǒng)主要有以下特點:遺傳背景清楚;易于培養(yǎng)和控制;轉(zhuǎn)化操作簡單;表達水平高;成本低;周期短。