標準物質(zhì)RM(reference material)是具有準確量值的測量標準,是具有一種或多種足夠均勻并已確定特性值的,用于校準設(shè)備、評價測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)。應(yīng)用于化學測量、生物測量、工程測量、無力測量等領(lǐng)域。
纖維蛋白:是人類發(fā)現(xiàn)最早的一種凝血因子,呈伸長的橢球體,是由三對多肽鏈(一對α鏈、一對β鏈、一對γ鏈)以二硫鍵連接而成的二聚物,在肝臟中合成后進入血漿,以溶解形式存在。
為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0. IMPa (121℃)維持15 ~ 30min即可徹底滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa (110℃) 滅菌20 ~ 30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。
TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質(zhì).TRIzol使樣品勻漿化,細胞裂解,溶解細胞內(nèi)含物,同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入lv仿離心后,溶液分為水相和有機相,RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中間層可回收DNA;用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質(zhì)。
最好新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。如果不是新鮮的(最好在半年之內(nèi),-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復(fù)凍融,從冰凍狀態(tài)拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組織解凍后,用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織,稱重后,放到預(yù)冷的勻漿器中,然后加入一定量的TRIZOL試劑,然后勻漿。
分子生物學是指在分子水平上研究生命現(xiàn)象的科學,從生物大分子(核酸、蛋白質(zhì))的結(jié)構(gòu)、功能和生物合成等方面來闡明各種生命現(xiàn)象的本質(zhì)。研究內(nèi)容包括各種生命過程,如光合作用、發(fā)育的分子機制、神經(jīng)活動的機理、癌的發(fā)生等。
細胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(“D途徑”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的“D途徑”。
組蛋白是構(gòu)成真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白,富含帶正電荷的Arg和Lys等堿性氨基酸,等電點一般在pH10.0以上,屬堿性蛋白質(zhì),可以和酸性的DNA緊密結(jié)合,而且一般不要求特殊的核苷酸序列。
細胞融合(cell fusion),細胞遺傳學名詞,是在自發(fā)或人工誘導下,兩個細胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜種細胞?;具^程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備,膜蛋白的研究。